第683章 不止如此(2 / 2)

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“既然常规的方法不行,那就换个思路。”

“不用裂解法,改用竞争结合法。”

“找一个能跟这段序列特异性结合的配体,把它从宿主基因组里钓出来,再换高盐或者低pH条件把配体洗掉,让目标序列自己释放。”

“配体可以用金属亲和层析柱,镍柱或者钴柱,选能跟磷酸骨架配位的过渡金属离子。”

罗清华眼睛一亮:“您是,用金属亲和色谱?”

“对,而且不用一次洗脱,要做梯度。”

“先用低浓度咪唑把非特异性结合的蛋白和核酸冲掉,再用高浓度咪唑梯度洗脱。”

“这段序列如果真有这么高的活性,它的构象应该很特殊,跟金属离子的结合强度会跟常规DNA拉开差距。”

战清在旁边听了,直接撸起了袖子。

“我来,我手稳,微量操作比你们年轻人准。”

老先生干这行五十多年了,对这些实验流程烂熟于心,哪怕七十多了手也稳得很,在场的人里还真没谁敢能做得比老先生好,也就没敢抢这来之不易的实验机会。

干就干,老先生转身就去准备层析柱和缓冲液。

罗清华赶紧招呼几个学生打下手,配试剂的配试剂,装柱的装柱。

肖宿站在战清旁边,眼睛盯着老先生的操作,偶尔出声提醒一句。

“尿素浓度可以再高一点,八摩尔每升试试”

“去垢剂的浓度梯度设三个点,零点五、一、二,看看哪个效果最好”。

战清装柱的手法确实漂亮,一根1毫升的微量层析柱,填料装得匀匀的,液面平得像镜面,梯度洗脱的流速控制在每分钟零点二毫升,一滴一滴往下走。

实验整整进行了三个多时,收集管里终于开始出峰了。

第一个洗脱峰,常规DNA和蛋白混合物,没信号。

第二个洗脱峰,战清加到了五十毫摩尔,收集管里的液体一进检测孔,荧光信号直接跳起来了,读数稳稳地往上走。

罗清华盯着屏幕,声音都有点变调:“出来了……活性单位比刚才高了两百多倍,这还只是粗提啊。”

战清又把咪唑浓度提到了两百毫摩尔,第三个峰出来的时候,所有人都围了过去。

检测孔里的荧光信号强得几乎要饱和,战清稀释了一百倍重新测,读数还是顶格。

“纯度百分之九十二以上。”罗清华念出数据,声音都有些发抖。

肖宿凑过去看了一眼图谱,忽然停住了。

他指着第二组数据里一个不起眼的峰道:“你们看这个伴生峰,它的洗脱时间和主峰高度相关,主峰出来它就出来,主峰没了它就没了。”

罗清华把图谱放大,看了几秒,倒吸了一口气:“这……这是两个不同的调控域?”

“不止如此。”

肖宿手指点在屏幕上。

“左端这个域,跟已知的肿瘤抑制通路有同源性,但是活性高了两个数量级。”

“右端这个域,跟干细胞多能性维持因子的结合位点高度相似。”

“而中间这段连接区,是一段全新的结构。”